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            基因變異的X戰警很拽酷?讓TaqMan Fast Advanced 預混液來協助你探索其中的秘密吧!

            2017-06-27

            來源: ABI AppliedBiosystems


            基因突變&基因表達

            演化推動了地球上生命的多樣性,從單細胞生物到今天地球的主宰——人類,隨機的基因突變和自然選擇為生命的無數問題提供了絕妙的的解決辦法和演化的原動力。在數十萬年、幾千世代不斷累積突變的演化中,恐龍的祖先們演化成鳥,猿類的祖先們演化成人……這個過程也許很漫長,但毫無疑問,它強大得令人難以置信。

            人類的基因一直處于變異中,雖然暫時還不會產生X-戰警的超能力,但是基因的變異對身體的改變還是要比我們想象得更大。你大概不會在起床后發現自己長了天使的翅膀,或具有心靈感應能力能閱讀他人的思維記憶,但在出生和成長的過程中,你的DNA一直都在“突變”。

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            而最能夠直觀展示DNA的突變的,就是“基因表達”,譬如X戰警那樣的超能英雄,他們就是能夠表達“X基因”的人類。他們遺傳密碼中的隨機突變解鎖了這個休眠的基因,進而通過表達相關的蛋白來造就出那些超于常人的能力。所以,我們也就看到了金剛狼擁有長生不老和超強的自愈能力,艾德曼合金“狼爪”堪稱無堅不摧;萬磁王擁有控制地球磁場和金屬的強大能力,透過操縱地球磁場來自由飛行;魔形女可以隨意變形為成類人物質的模樣,甚至連聲音、指紋等身體特征也一模一樣……

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            基因是怎樣調控表達讓我們進化成更優秀的物種的呢?溫度壓力等環境因素又是如何影響基因表達的?這時候就需要賽默飛的 TaqMan Fast Advanced 預混液來幫助大家探尋這些問題的答案啦!

            更高的靈敏度和準確度、更廣的動態范圍和更強的特異性……如此優秀的 TaqMan Fast Advanced 預混液將會幫助大家進行更精準快速可靠的基因表達分析!

            特點&優勢

            ◆ TaqMan Fast Advanced 預混液具備一流的性能——與標準模式下的標準預混液相比,靈敏度、準確度、動態范圍和特異性更佳

             

            ◆ 經過專門設計,穩定性更強——在預制的反應中,可在室溫下穩定放置長達72小時

             

            ◆ 經過優化,可用于多重分析——經過驗證可用于外源性和內源性內部陽性對照試驗雙重分析

             

            ◆ 在快速和標準儀器上的運行時間更短——在快速版儀器和標準版儀器的快速循環條件下進行了優化

             

            ◆ 無縫過渡到您的實驗——經過Applied Biosystems? TaqMan? Assay(基因表達和microRNA)以及Applied Biosystems? TaqMan? Array微流體芯片的驗證

             

            Applied Biosystems? TaqMan? Fast Advanced預混液性能優于標準預混液(圖1),運行時間內更短(<40 分鐘),結果媲美乃至超越當前方法。

             

            我們最新款的一流品質的基因表達預混液采用 Applied Biosystems? AmpliTaq? Fast DNA聚合酶,穩定性更好,使您的預制反應液能夠在室溫下穩定放置長達72小時而不影響性能。該配方非常適合內源和外源性對照測定的雙重PCR,使您能夠在每個孔內運行對照,從而獲得更可靠的結果。

             

            為提高靈活性,TaqMan Fast Advanced預混液也在快速版儀器和標準版儀器的快速PCR循環條件下進行了優化,可確保成功完成所有TaqMan基因表達和microRNA分析,并無縫過渡到您的實驗。

             A

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            B

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            圖1. TaqMan Fast Advanced預混液與Applied Biosystems? TaqMan?通用型PCR預混液的性能比較。(A) 13個TaqMan基因表達測定組合中Ct值的比較。(B) 使用Applied BiosystemsTM 7500快速實時熒光定量PCR系統和FN1 TaqMan基因表達檢測法,在4次重復反應中對人cDNA的連續稀釋液進行擴增,獲得實時熒光定量PCR代表性擴增圖。

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            表1. TaqMan Fast Advanced Master Mix與其他領先品牌產品之間的動態范圍比較。比較組內各TaqMan基因表達測定的檢測范圍(以對數單位表示)。 檢測范圍的PCR效率必須在85%到115%之間,R2值≥0.98。使用cDNA模板測試每種預混液,并根據制造商的推薦方案運行。在Applied Biosyste-ms? 7900HT快速實時熒光定量PCR系統上運行反應(重復6次)。

             一流的性能

            TaqMan Fast Advanced預混液性能優于現有標準預混液。它對標一線廠商的標準和快速預混液,確保提供最佳的靈敏度、準確性、動態范圍和特異性。該產品具有無與倫比的動態范圍,如表1所示。這些結果表明,與一線廠商的標準和快速預混液相比,該預混液可在更寬的動態范圍內提供可靠的目標定量。在各種測定中,它可在相同運行條件下檢測2個額外的數量級。

            室溫穩定,處理通量高,方便快捷

            TaqMan Fast高級預混液在預制反應體系中可維持其高水平性能長達72小時之久。該預混液的穩定性可確保高通量液體處理系統用戶獲得始終如一的結果。對于少數的極高通量需求,更高的穩定性有助于提高工作流程的總體便捷性,使您無需在配液完成后立即運行反應板。

             

            圖2顯示了在模擬最極端的室溫條件下,在配液(時間0)時和在30℃孵育72小時后的測定。72小時后的結果顯示該測定具有優異的PCR效率和 R2值,幾乎與時間0相同,并且時間0與72小時之間的ΔCt小于1。

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            圖2. TaqMan Fast Advanced預混液的室溫穩定性。在 (A) 配液完成(時間0)和 (B) 在30℃下孵育72小時后,運行B2M TaqMan基因表達測定。(C) 與時間0相比,72小時后的結果具有優異的PCR效率、R2值和Ct。

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            圖3. TaqMan Fast Advanced 預混液經過優化,可用于外源或內源性對照測定的多重分析。通過對ACTB(β-肌動蛋白基因)進行連續稀釋并在單靶標和雙靶標反應中進行擴增,得到結果。雙靶標反應包括單靶標ACTB和 (A) 恒量的外源靶標或 (B) 相對量的內源靶標。

             

             經過優化適用于多重分析

            我們深知結果的可信度至關重要。為了提高每個孔所得結果的可信度,TaqMan Fast Advanced預混液利用內部陽性對照 (IPC) 幫助獲得準確的雙重反應結果。通過在單靶標反應和雙靶標反應中對實驗靶基因ACTB(β-肌動蛋白)進行連續稀釋和擴增,得到圖3所示的結果。雙靶標反應包括單靶標ACTB和(圖3A)恒量的外源靶標或(圖3B)相對量的內源靶標。TaqMan Fast Advanced預混液在單靶標和雙靶標環境中為ACTB提供了幾乎相等的PCR效率、R2和Ct值。

             

            經過驗證可用于microRNA測定

            TaqMan Fast Advanced Master Mix經過驗證可用于多種實時PCR應用,包括microRNA測定。該配方可提供高特異性和動態范圍,它們是成功獲得microRNA測定結果的兩個最關鍵的性能屬性。圖4數據顯示,在覆蓋6個數量級的模板輸入量范圍內,結果具有優異的PCR線性。

             

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            圖4.在6個數量級的輸入量動態范圍內的miRNA線性靶標擴增。使用7900HT快速實時熒光定量PCR系統和Let-7c TaqMan MicroRNA檢測試劑盒,在4次重復反應中對合成靶標的連續稀釋液進行擴增,得到實時PCR擴增圖和標準曲線。

             

            縮短在標準儀器上的運行時間 

            TaqMan Fast高級預混液同時適用于快速和標準版儀器,使得當前的標準版儀器用戶也可以享有其性能優勢和省時特點。圖5顯示了在Applied Biosystems? QuantStudio? 12K Flex實時熒光定量 PCR系統的快速熱循環條件下,使用TaqMan Fast Advanced預混液獲得的優異成果。該預混液經過所有Applied Biosystems?標準實時熒光定量PCR儀器(包括QuantStudio、7900HT、7500和7300系統)的測試,無論您是否擁有快速版儀器,都能獲得成功的結果。

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            圖5. 在QuantStudio 12K Flex實時熒光定量PCR系統上使用TaqMan Fast Advanced預混液獲得的結果。使用真核18S rRNA TaqMan基因表達檢測試劑盒和QuantStudio 12K Flex實時熒光定量PCR系統,對人cDNA的連續稀釋液進行擴增,8次重復實驗,獲得實時熒光定量PCR擴增圖。




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